溃疡性结肠炎主要依赖于结肠镜检查，肠镜下表现肠黏膜多发生浅表糜烂和溃疡，存在脓性分泌物，黏膜充血、水肿、血管纹理模糊，病变从直肠开始出现连续弥漫性分布。X线检查也是一种检查方法，可以表现为钡灌肠时存在浅表溃疡、黏膜紊乱，有时可以看到结肠袋消失、肠管缩短、变细、呈铅管样。化验检查包括粪便检查存在白细胞，长期腹泻的患者会出现贫血，炎症指标增快。
溃疡性结肠炎的诊断有赖于仔细分辨，出现腹痛、腹泻、黏液脓血便、发热时和细菌性痢疾进行鉴别。细菌性痢疾一般病程较短，短则3-5天或1周内。溃疡性结肠炎一般反复发作1周，大多数患者都是3个月以上。整个病程存在漫长迁延的腹痛、腹泻，所以患者出现长期慢性腹痛、腹泻、黏液脓血便，多次反复发作，需要赶快到医院进行诊断治疗。