氯仿属于中等毒性的毒性物质，且具有强麻醉性。氯仿是三氧甲烷的别名，属于毒性物质，为无色透明液体，有特殊气味，极易挥发，其蒸气有毒，有麻醉性。氯仿不溶于水，可溶于醇、醚、苯等，误食会中毒。
氯仿暴露于空气和光照下，与氧缓慢作用，分解产生光气、氯和氯化氢等有毒物质，此外，普通氯仿中加有0.5%-1.0%的乙醇作稳定剂，与产生的光气作用会转变成有毒的碳酸二乙酯。
氯仿具有麻醉性，还被称为亲肝性毒物，如果人体长期接触，易损害肝脏，可能会造成急性或者是慢性肝炎。氯仿有一定的肾毒性，由氯仿引起的肾毒性种属差异大。
需要注意，如果皮肤不小心接触液体氯仿，会产生很强的脱脂作用，对皮肤造成损伤，进一步感染会引起皮炎。
氯仿在小剂量浓度下还可以使得细菌死亡，利用这一特性，可以通过驯化厌氧菌来降解生物异性化合物质(指人为制造且在自然环境中难以发现的有机化合物)，使其生成甲烷和没有毒性的氯离子。
纯氯仿的沸点为61.7℃，且氯仿不燃烧，在与高温、明火或红热物体接触后会产生剧毒的光气和氯化氢气体，因此，日常应将氯仿放置于阴凉处密封贮 存，避免直接接触。