急性胆囊炎需要与十二指肠溃疡穿孔、急性胰腺炎、高位急性阑尾炎、急性肠梗阻、急性病毒性肝炎进行鉴别。
1、十二指肠溃疡穿孔：多数患者有溃疡病史，其腹痛程度较剧烈，呈连续的刀割样痛，腹壁强直显著，常呈“板状腹”，压痛、反跳痛明显，肠鸣音消失，腹部X线检查可发现膈下有游离气体可确诊，而胆囊炎不会出现膈下游离气体。
2、急性胰腺炎：腹痛多位于上腹正中或偏左，体征不如急性胆囊炎明显，血清淀粉酶升高幅度显著；B超显示胰腺肿大，边界不清等而无急性胆囊炎征象；CT检查对诊断急性胰腺炎较B超更为可靠，而胆囊炎患者B超会有明显表现。
3、高位急性阑尾炎：多为转移性腹痛，腹壁压痛，腹肌强直均可局限于右上腹，易误诊为急性胆囊炎，但B超无急性胆囊炎征象有助于鉴别。此外，胆囊炎的反复发作史，疼痛的特点，对鉴别诊断也有参考价值。
4、急性肠梗阻：肠梗阻的绞痛多位于下腹部，常伴有肠鸣音亢进，腹痛无放射性，腹肌亦不紧张，X线检查可见腹部有液平面。
5、急性病毒性肝炎：急性重症黄疸型肝炎可有类似胆囊炎的右上腹痛、发热、白细胞计数增高及黄疸症状，但肝炎患 者常有食欲不振、疲乏无力、低热等前驱症状，体检常可发现肝区普遍触痛，白细胞一般不增加，肝功能明显异常，一般不难鉴别。