测空腹血糖较为准确的时间在6:00-8:00，但是也并不绝对，因为这个时间段，正常人醒来还没有吃早饭，所以时间定在6:00-8:00。如果到8点仍然不能吃饭，机体血糖实际就要开始减少，如果此时仍然不能补充糖分，机体会动员其他的肝糖原、肌糖原，补充血糖稳定。空腹的最长时间为12小时，如果12小时后仍然不能摄入糖分，机体就要开始补充，否则机体可能出现低血糖，血糖可能出现反弹，所以在6:00-8:00测空腹血糖较为合适。
如果有特殊情况，需要加测凌晨的血糖，如3:00-4:00也可以，但基本要求空腹时间在8小时以上。按常规的作息制度而言，晚上吃饭后夜里基本休息，早晨起床，醒来之后的6:00-8:00，测定空腹血糖相对较为平衡、准确。如果8:00或10:00仍然不检测血糖，而是之后再测，除升糖激素、肝脏动员糖原外，包括机体的交感神经兴奋，实际不能真实地反映空腹血糖水平。