当需要检测空腹血糖时，至少要空腹8-10h，最好是8-12h，一般情况下也避免超过16h。所谓的空腹一般是指隔夜，而不是白天空腹10h也可以测定。通常是隔夜空腹8-12h，在第2天早晨7:00-9:00进行空腹血糖检测，比较准确。
空腹是指不进食任何食物，但是在早晨时，如果需要吃药可以少量喝白水。另外，早晨测定空腹血糖的时间也有所规定，通常在早晨7:00-9:00。如果过晚测定空腹血糖，结果不准确。原因是在上午时会有升血糖激素的分泌，升高血糖的激素包括生长激素、糖皮质激素、ACTH(促肾上腺皮质激素)。这些激素有一定的节律，在上午时分泌会增加。
因此，即便空腹8-12h，在上午9:00以后抽取空腹血糖，由于升糖激素的分泌，也会导致血糖有所升高，而产生不准确的情况。而且如果空腹时间过久，超过16h，血糖过低，也会导致升糖激素的分泌，从而导致空腹血糖的测定不够准确。