梅毒确诊最常用的方法是梅毒血清学试验，根据所使用的抗原不同，分非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体血清试验。不同实验室出结果的时间会有所不同，一般为3-7天。
非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性比较好，但特异性差，妊娠期妇女、老年人、恶性肿瘤患者会出现假阳性。梅毒螺旋体血清试验是针对梅毒螺旋体特异性抗原蛋白产生的抗体，敏感性和特异性比较高。其他辅助检查包括暗视野显微镜检查、脑脊液检查、影像学检查和皮肤组织病理学检查，检查所需的时间一般是2-5天。以上检查不是确诊早期梅毒的必要检查，但脑脊液检查在神经 梅毒诊断中是必须做的检查。