T-SPOT阴性不能排除结核，结核一般指结核分枝杆菌感染引起的结核病，以肺结核多见，发病后常有午后低热、盗汗、全身乏力、体重下降等症状，如果想要明确诊断，还需要进一步完善其他检查。
T-SPOT的检查原理主要是机体感染结核分枝杆菌以后，可刺激机体免疫系统，产生对结核分枝杆菌敏感的T细胞，这种T细胞受到结核分枝杆菌相关抗原刺激后，可以产生γ干扰素，检查主要是利用结核分枝杆菌相关抗原去刺激T细胞，看产生γ干扰素的个数。如果是阴性，说明产生γ干扰素的T细胞不多，可能不存在结核分枝杆菌感染的情况。
但是T-SPOT仍然存在假阴性的可能，因为机体刚感染结核分枝杆菌以后，会先在体内潜伏2-8周，这个时候进行T-SPOT检查结果是阴性的。因此，对于结核病的确诊，还需要进行血常规、血沉、痰结核分枝杆菌培养、结核菌素试验、结核抗体检查、胸部X线、胸部CT等检查，联合检查者的症状、体征等，进行综合评估。
此外，T-SPOT的特异性是比较高的，并不受卡介苗影响，尤其适合免疫功能差，比如存在糖尿病、艾滋病、硅肺病、肾病或长期服用免疫抑制剂的人群，适合作为结核病的辅助检查手段。