脑脊液穿刺部位以骼后上棘连线与后正中线的交会处为穿刺点，一般取第3-4腰椎棘突间隙，有时也可在上一或下一腰椎间隙进行。术者用左手固定穿刺点皮肤，右手持穿刺针在原穿刺点向头的方向穿刺进针。当针头穿过韧带与硬脑膜时，可感到阻力突然消失有落空感，此时将针芯慢慢抽出，以防脑脊液迅速流出，造成脑疝，即可见脑脊液流出。通过腰椎穿刺进行脑脊液性质的检查，对患者进行中枢神经系统疾病的辅助诊断和治疗。

严格掌握禁忌证，凡疑有颅内压升高、患者处于休克、衰竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、后颅窝有占位性病变者均禁忌穿刺。穿刺时要尽可能使用外径较细的穿刺针，放脑脊液不宜过快或过多，避免出现“低颅压综合征”或“脑疝”。穿刺时患者如出现呼吸、脉搏、面色异常等症状时，应立即停止操作，并给予相应处理。