做C14呼气试验之前通常需要空腹，空腹能稳定胃内环境，避免食物干扰幽门螺杆菌与尿素的反应，且利于胶囊均匀分布，从检测准确性方面看空腹可减少假阴性结果，避免食物抑制幽门螺杆菌活性，也能避免假阳性结果。
- 空腹状态有助于确保胃内环境相对稳定，减少食物对幽门螺杆菌活性以及尿素酶与尿素反应的干扰，如果胃内有大量食物残留，食物可能会稀释尿素胶囊，影响尿素与幽门螺杆菌尿素酶的充分接触，从而导致检测结果不准确。
- 胃排空后，胃内基本处于一种相对清洁的状态，在空腹时进行试验，口服的C14-尿素胶囊能够更均匀地分布在胃黏膜表面，与幽门螺杆菌充分作用，如果进食后不久进行检测，胃内食物尚未排空，新摄入的食物会影响胶囊在胃内的分布和停留时间，不利于准确检测幽门螺杆菌分解尿素产生C14标记二氧化碳的过程。
- 食物可能会暂时抑制幽门螺杆菌的活性，如果在这种情况下进行C14呼气试验，就可能出现假阴性结果，即患者实际上感染了幽门螺杆菌，但检测结果显示为阴性。
- 而胃内食物残渣可能会滋生其他产生尿素酶的细菌，这些细菌如果在检测时分解了C14标记的尿素，就会产生C14标记的二氧化碳，从而导致假阳性结果，使没有感染幽门螺杆菌的患者被误判为感染。
做C14呼气试验前除空腹外，还需注意近一月内未使用抗生素、铋剂等药物，以免影响检测结果；检查前需停用质子泵抑制剂至少2周；保持口腔清洁；避免吸烟、饮酒；若为儿童检测，需严格遵循医生指导，确保检测顺利进行及结果准确。