核酸的Ct值是指循环阈值,所谓Ct值是在PCR(聚合酶链式反应)过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。
尽管平台期DNA拷贝数波动很大,但Ct值却相对固定,如果用不同浓度的模板DNA做PCR,可以看出模板DNA浓度越高,Ct值越小。模板DNA浓度每增加1倍,Ct值则减小1个循环,Ct值与模板DNA的起始拷贝数成反比。
在实际操作中,Ct值是在基线上方产生可检测到的统计学上显著荧光发射时所对应的PCR循环次数。阈值高度的量化定义是基线范围荧光信号强度标准偏差的10倍,阈值所在的横线与PCR扩增曲线的交点所指的PCR循环数就是Ct值。
基线范围的定义是从第3个循环起到Ct值前3个循环止,其终点要根据每次实验的具体数据进行调整,一般3-15个循环之间。早于3个循环时,荧光信号很弱,扣除背景后的校正信号往往波动很大,不是真正的基线高度。
而在Ct值前3个循环之内,大多数情况下荧光信号已经开始增强,超过了基线高度,也不宜当作基线来处理。
Ct值取决于阈值,阈值取决于基线,而基线取决于实验的质量。Ct值是1个实验客观的参数,Ct值越小,模板DNA的起始贝数就越多,Ct值越大模板,DNA的起始拷贝数就越少。临床上较多疾病都可以通过PCR技术来检测,如新型冠状病毒感染。

