25-羟维生素D3的正常参考值范围是30-100ng/mL。25-羟基维生素D3的数值小于20ng/mL为维生素D缺乏，25-羟基维生素D3的数值在20-30ng/mL，通常为维生素D不足，如果25-羟基维生素D3的数值大于150ng/mL，则提示出现维生素D中毒。
25-羟维生素D3是维生素D的一种活性形式，主要的生理作用是调节钙、磷元素的代谢和吸收，促进胃肠道吸收钙、磷元素，促使钙、磷沉积在骨骼上，参与骨形成、骨吸收、骨矿化，减少骨折的风险，也能减少肌少症，维持神经肌肉的正常。充足的25-羟维生素D3，能够降低高血压，以及糖尿病的发生和发展，减少心血管疾病的死亡率。可以通过饮食来补充25-羟维生素D3，如食用鳟鱼、金枪鱼、鳗鱼等深海鱼类，如果25-羟维生素D3缺乏较严重，可以在医生的指导下使用维生素D滴剂。