有硬下疳症状但血检阴性，可能是正常情况。梅毒的血清学检测主要检测梅毒抗体，从感染到产生抗体，需要一些时间，抗体产生到可以被试剂检出也需要一些时间，因此血清学检测通常滞后于感染进程。如出现疑似硬下疳的症状，可以考虑做镜检。梅毒螺旋体为引起梅毒的病原体，感染后，可作为抗原刺激免疫系统产生反应，产生特异性免疫细胞以及抗体，但这个免疫应答的过程滞后于感染。
当使用梅毒血清学检测时，症状可能早于血清学反应，即存在窗口期。当有典型的初期梅毒症状时，如硬下疳等皮肤损害，可以进行更为直接的检测，即检测组织或体液中的梅毒螺旋体，如硬下疳渗出液作为标本，使用暗视野显微镜直接观察，若发现有动力的梅毒螺旋体即可确诊。
此外，针对病原的酶联免疫吸附试验或分子扩增试验也可以使用。如组织或体液中的梅毒螺旋体检测为阳性结果，则应立即开始治疗，遵医嘱使用抗生素，如注射用青霉素钠、注射用头孢曲松钠等，将梅毒螺旋体悉数杀灭，即可治愈梅毒。同时也可以消除梅毒的传染性，防止传播。