胰岛素瘤早发现、早治疗，对于控制病情、改善症状、预防并发症及其重要，此病以手术为主，良性肿瘤术后预后良好，恶性预后差，以化疗为主。
血糖测定
空腹及发作时低血糖，发作时血糖低于2.8mmol/L(50mg/dI)。
胰岛素释放试验
正常人空腹胰岛素在172pmol/L(24μU/ml)以下，胰岛素瘤患者超过正常。一般采用胰岛素释放指数作为诊断指标，胰岛素释放指数=[血浆胰岛素(μU/ml)]/[血浆葡萄糖(mg/dI)]，正常人<0.3，胰岛素瘤患者>0.4，可在1.0以上。胰岛素释放修正指数=[血浆胰岛素(μU/ml)X100]/[血浆葡萄糖-30(mg/dl)]，正常人<50μU/mg，>85μU/mg提示本病。
饥饿试验(禁食试验)
必要时进行。胰岛β细胞瘤患者禁食12~18小时后，约有2/3的病例血糖可降至3.3mmol/L以下，24~36小时后绝大部分患者发生低血糖症(血糖<2.8mmoI/L，而胰岛素水平不下降)。如禁食72小时不发生低血糖症者，可排除本病。
刺激试验
葡萄糖刺激胰岛素释放试验(行4小时口服葡萄糖耐量试验，同时测定血糖和胰岛素)，如胰岛素高峰超过15μU/ml为阳性。
甲磺丁脲(D860)刺激试验，胰高糖素试验
可刺激胰岛素大量分泌而诱发低血糖，对病人比较危险，应严格掌握适应症，并在医生监护下进行。
影像检查
如超声和CT、MRI有助于肿瘤的定位诊断；但大部分肿瘤的瘤体较小(直径5.5~10mm)，可采用选择性腹腔动脉血管造影来进行术前定位。有条件可经皮肝穿刺插管做胰腺分段取血，测定胰岛素和C肽等。对疑有多发性内分泌腺瘤病患者，应做相应部位的定位检查及相关的实验室生化检查和激素测定。
2019年NCCN神经内分泌和肾上腺肿瘤指南，符合以下4条可诊断为胰岛素瘤：
血糖＜55mg/dl(3mmol/L)；
同步血清胰岛素＞18pmol/L；
同步血清C肽≥0.6ng/mL；
血清胰岛素原≥5pmol/L。
胰岛素瘤多表现为低血糖症状，其症状多为发作性，且不特异，临床常误诊为其他疾病，鉴别诊断在其诊断中占据重要地位。其鉴别诊断主要是对低血糖原因的鉴别，常见引起低血糖的原因包括药物、酒精、非β细胞肿瘤、肝衰竭、肾衰竭、肾上腺功能低下、胰岛素瘤、胰岛素自身抗体、胰岛素受体自身抗体、脓毒血症等，主要如下：
药物及酒精
药物是引起低血糖最常见的原因，胰岛素、胰岛素类似物等降糖药物为临床最常见的药物。此外，喹诺酮类、五胺类、奎宁类、β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶制剂和胰岛素样生长因子等也可引起低血糖，酒精可通过抑制糖原异生而造成低血糖。
非胰岛细胞肿瘤诱导的低血糖
肿瘤相关低血糖可与三种因素有关，包括肿瘤产生过多胰岛素；肿瘤相关因素如肿瘤浸润破坏肝脏及肾上腺；肿瘤产生干扰葡萄糖代谢的物质，如胰岛素受体抗体、各种细胞因子、儿茶酚胺、胰岛素样生长因子。最后一种情况也称为非胰岛细胞肿瘤诱导的低血糖症，其为一种罕见但严重的副瘤综合征，可出现于几乎所有的良性及恶性肿瘤中，但最多见于间质和上皮来源的实体瘤。
反应性低血糖
反应性低血糖多表现为餐后低血糖，可见于糖耐量受损、早期2型糖尿病患者及接受胃部手术者。正常人葡萄糖负荷后，血糖及胰岛素均在1小时达高峰，而糖耐量受损及早期2型糖尿病患者其胰岛素分泌高峰延迟，导致葡萄糖负荷后的早期高血糖加重，而在胰岛素分泌达高峰时出现低血糖，可通过葡萄糖耐量试验及胰岛素分泌试验与胰岛素瘤鉴别。
胰岛素自身免疫综合征
胰岛素自身免疫综合征又称自身免疫性低血糖症，以出现针对内源性胰岛素的自身抗体为特征，其发病与自身免疫性疾病或应用含巯基药物(如甲巯咪唑)相关。葡萄糖负荷后，患者初表现为高血糖，几小时后出现低血糖。高血糖是由胰岛素自身抗体与胰岛素结合引起，这种结合导致肝脏和外周组织中胰岛素受体可用的胰岛素减少，出现高血糖和进一步的胰岛素分泌。随着血糖浓度降低和胰岛素分泌下降，与胰岛素自身抗体结合的胰岛素被释放，血游离胰岛素浓度过高，而出现低血糖。其实验室检查表现为胰岛素明显升高，Ｃ肽升高、胰岛素与Ｃ肽比值＞１，血中出现胰岛素自身抗体。
胰岛细胞增生症胰岛细胞增生症
也是高胰岛素血症性低血糖的常见原因，其低血糖多表现为餐后低血糖。根据临床表现和生化检查难与胰岛素瘤鉴别，选择性动脉钙刺激静脉采血示胰岛素的分泌来自整个胰腺多提示胰岛细胞增生症，最终确诊需依赖病理诊断。
严重疾病及激素缺乏
肾衰竭时肾糖异生功能受损、胰岛素和低血糖药物的半衰期延长(糖尿病)、恶心、呕吐等导致热量摄入不足均可导致低血糖。肝衰竭时肝糖异生及糖原分解受损，葡萄糖供应不足。多器官功能衰竭时低血糖可能还与包括肾上腺和垂体在内的内分泌器官功能障碍有关。垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退等导致的激素缺乏也是导致低血糖的少见原因。
